Домашня птиця 2018 - акція      
   Продамо підрощених курочок    
   Стан птахівництва у 2018 році   



Dutch English French Italian Polish Russian Turkish Ukrainian

ДСТУ 8104:2015. Яйця харчові, продукти яєчні. Методи визначання мікробіологічних показників

Додаток А

(обов’язковий)

ПОЖИВНІ СЕРЕДОВИЩА І РЕАКТИВИ

 

А.1 Поживні середовища готують у лабораторії, дотримуючись вимог ДСТУ ISO/TS 11133-1.

А.1.1 Для готування розчинів, реактивів і поживних середовищ використовують воду дистильовану згідно з ГОСТ 6709 чи ДСТУ ISO 3696 або очищену. Готують у посуді з інертного матеріалу.

А.1.2 Всі середовища, які стерилізують в автоклаві, розливають у стерильний посуд.

А.1.3 Враховуючи можливу зміну pH поживних середовищ після кип'ятіння та стерилізації, під час готування середовищ встановлюють pH на 0,2 вище вказаного, що визначають дослідним шляхом для кожного середовища. Заключний контроль pH проводять у готовому середовищі з використанням pH-метра (рідкі середовища) або паперових індикаторів з шагом діапазону не більше ніж 0,2 (агаризовані середовища). Визначання проводять згідно з інструкцією з використання приладу або індикаторної системи.

А.1.4 Після стерилізації поживні середовища охолоджують за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС), після чого поміщають у холодильник з температурою (6±2) оС, якщо в Інструкції щодо застосування конкретного препарату не вказано інші умови зберігання.

А.1.5 Готові розлиті у пробірки напіврідкі поживні середовища та середовища з поплавками зберігають за кімнатної температури не більше ніж 7 діб. Виготовлені і розлиті у стерильні чашки Петрі середовища можна зберігати за температури (4±1) оС до 10 діб.

А.1.6 Температуру середовищ, які зберігали у холодильнику, перед посівом треба довести до кімнатної.

А.1.7 Якщо середовище необхідно розлити у чашки Петрі, то його охолоджують до температури від 50 оС до 60 оС.

А.1.8 На поверхні розлитого у чашки Петрі середовища не повинно бути слідів вологи. В разі наявності на поверхні середовища слідів вологи чашки перед використанням підсушують у термостаті.

А.1.9 Контролювання стерильності поживних середовищ

Поживні середовища після приготування та стерилізування поміщають до термостату за температури (37 ± 1) оС на 48 год., після чого їх продивляються. Якщо на середовищах не з’являться ознаки росту мікроорганізмів, їх вважають стерильними.

А.2 Ізотонічний розчин хлористого натрію (фізіологічний розчин)

А.2.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

8,5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

А.2.2 Готування

Хлористий натрій (хлорид) розчиняють у дистильованій воді. Розчин доводять до кипіння, охолоджують, фільтрують крізь паперовий фільтр, розливають у колби або пробірки і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.3 Буферизована пептонна вода

А.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

0,45

ГОСТ 2493

Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4)

5,3

ГОСТ 11773

Пептон

10,0 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (NaCl)

5,0 г

ГОСТ 4233

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.3.2 Готування

Компоненти розчиняють у дистильованій воді, підігріваючи за необхідності. Розчин розливають у пробірки чи флакони і стерилізують в автоклаві за температури (121±0,5) оС протягом 30 хв.

А.4 Пептонно-сольовий розчин

А.4.1 Склад

 

А.3.2 Готування

Компоненти розчиняють у дистильованій воді, підігріваючи за необхідності. Розчин розливають у пробірки чи флакони і стерилізують в автоклаві за температури (121±0,5) оС протягом 30 хв.

А.4 Пептонно-сольовий розчин

А.4.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Натрію хлорид (NaCl)

8,5 г

ГОСТ 4233

Пептон

1,0 г

ГОСТ 13805

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.4.2 Готування

Хлорид натрію та пептон розчиняють у дистильованій воді з повільним нагріванням. Одержаний розчин за необхідності фільтрують через паперовий фільтр, встановлюють рН (7,0±0,1), розливають у колби, пробірки чи інший посуд, закупорюють і фільтрують за температури (121±1) оС протягом 30 хв.

Розчин зберігають у темному місці за температури (4±2) оС не більше ніж 30 днів в умовах, що виключають випаровування вологи.

Під час проведення досліджувань температура пептонно-сольового розчину повинна бути однаковою з температурою досліджуваного продукту.

А.5 М'ясна вода

Охолоджену яловичину або конину вивільнюють від кісток, сухожилля, жиру, пропускають через м’ясорубку. Один кілограм отриманого фаршу заливають дво- або трикратною кількістю водопровідної води (за масою), нагрівають і кип’ятять протягом 1,5 год, постійно помішуючи і видаляючи накип. Після кип’ятіння м’ясну воду охолоджують, видаляють жир. Рідину фільтрують крізь вату чи полотно, потім крізь фільтрувальний папір до повної прозорості. Фільтрат вимірюють і доливають до початкового об’єму кип’яченою водопровідною водою, потім розливають по бутлям і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 30 хв.

А.6 М'ясо-пептонний бульйон – МПБ

А.6.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

М’ясна вода

1 дм3

Згідно з А.5

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Натрію гідроокис (NaОН)

ГОСТ 11078

А.6.2 Готування

До м’ясної води додають пептон, хлористий натрій і дистильовану воду (на википання); кип’ятять до розчинення пептону. До гарячого бульйону додають 10 % розчин гідроокису натрію до встановлення рН (7,4±0,2), після чого бульйон кип’ятять ще раз протягом 15 хв. і фільтрують через зволожений дистильованою водою складчастий паперовий фільтр. Профільтрований бульйон повинен бути цілком прозорим, солом’яно-жовтого кольору. Бульйон розливають у ємності (колби) і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.7 М'ясо-пептонний агар – МПА

А.7.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПБ

1 дм3

Згідно з А.6

Агар-агар

2 (20) г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

А.7.2 Готування

До м'ясо-пептонному бульйону додають агар-агар (агар мікробіологічний): 2 г для виготовлення напіврідкого або 20 г для виготовлення щільного м'ясо-пептонного агару. Суміш кип’ятять на слабкому вогні, постійно помішуючи, до повного розчинення агару.

Приготований м'ясо-пептонний агар розливають у пробірки або колби і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.8 Агар для підраховування колоній (АПК)

А.8.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Сухий ферментативний гідролізат казеїну

5,0 г

Згідно з чинними НД

Сухий дріжджовий екстракт

2,5 г

Глюкоза

1,0 г

ГОСТ 6038

Агар-агар

від 9 г до 18 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.8.2 Готування

Складники розчиняють у підігрітій воді у такому порядку: дріжджовий екстракт, ферментативний гідролізат казеїну, глюкоза. Додають агар і доводять до кипіння, часто помішуючи, поки агар повністю розчиниться. Встановлюють рН так, щоб після стерилізації середовища одержати значення (7,0 ± 0,2) за температури 25 оС. Середовище розливають у пробірки по (12-15) см3 або у колби чи флакони місткістю не більше ніж 500 см3. Стерилізують в автоклаві протягом 15 хв. за температури 121 оС.

Якщо середовище будуть використовувати одразу, його перед висіванням охолоджують у водяній бані до температури від 44 оС до 47 оС. Середовище можна зберігати у темряві за температури (3 ± 2) оС, але не довше ніж 3 місяці.

А.9 Покривне поживне середовище

А.9.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Агар-агар

від 12 г до 18 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.9.2 Готування

Агар вносять у воду і нагрівають до кипіння, постійно перемішуючи, протягом 30 хв. до його повного розчинення. Встановлюють рН так, щоб після стерилізації середовища одержати значення (7,0 ± 0,2) за температури 25 оС. Середовище розливають у пробірки по 4 см3 або у колби чи флакони. Стерилізують в автоклаві протягом 15 хв. за температури 121 оС.

Якщо середовище будуть використовувати одразу, його перед висіванням охолоджують у водяній бані до температури від 44 оС до 47 оС. Середовище можна зберігати у темряві за температури (3 ± 2) оС, але не довше ніж 3 місяці.

А.10 Середовище Кесслера (з лактозою)

А.10.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натуральна стерильна жовч,абоСуха яловича жовч

50 см3

5 г

Вода

1 дм3

ГОСТ 2874

Лактоза

2,5 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

до 1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Індикатор кристалічнийфіолетовий або генціанфіоле-товий (1% водний розчин)

2 см3

Згідно з чинними НД

А.10.2 Готування

Пептон, натуральну стерильну або суху яловичу жовч додають до водопровідної води, ретельно перемішують, кип’ятять протягом часу від 20 хв до 30 хв, фільтрують крізь ватний фільтр, додають лактозу і доводять об’єм дистильованою водою до 1 дм3 . Встановлюють рН (7,5±0,1), додають 2 см3 1 % водного розчину кристалічного фіолетового або генціанфіолетового. Середовище розливають у пробірки з поплавками по 5 см3 і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 15 хв. Середовище має фіолетовий колір.

А.10.3 Середовище можна готувати із готового сухого продукту згідно з прописом на етикетці пакування (для отримання подвійної концентрації інгредієнтів, об'єм води зменшують вдвоє).

А.11 Середовище Хейфеца з лактозою

А.11.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Лактоза

5 г

Згідно з чинними НД

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

Розолова кислота

0,5

Згідно з А.11.3

Спирт етиловий ректифікований 96 %

10 см3

ДСТУ 4221

Метиленовий синій (блакитний)

0,1

Згідно з А.11.3

Вода

1 дм3

ГОСТ 2874

А.11.2 Готування

У колбу місткістю 1 дм3 вносять пептон, лактозу, хлористий натрій та індикатори: 1 см3 5 % спиртового розчину розолової кислоти і 2,5 см3 водного розчину метиленового синього (блакитного), заливають водопровідною водою і нагрівають до кипіння. Встановлюють рН від 7,4 до 7,6. Середовище розливають по 10 см3 у стерильні пробірки з поплавками. Стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.11.3 Готування індикаторів

А.11.3.1 0,5 г порошку розолової кислоти висипають у флакон з притертим корком і заливають 10 см3 етилового ректифікованого спирту 96 %. Через 24 год. розчин готовий до вживання. Розчин можна використовувати протягом місяця.

А.11.3.2 0,1 г метиленового синього (блакитного) заливають 100 см3 дистильованої води, ставлять на добу у термостат за температури (37±1) оС. Термін використання водного розчину метиленового синього (голубого) не обмежений.

А.12 Середовище Левіна

А.12.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон сухий ферментативний для бактеріологічних цілей

15 г

ГОСТ 13805

Гідролізат казеїну ферментативний неглибокого ступеню розщеплення

12 г

Згідно з чинними НД

 

Дріжджовий екстракт

3 г

Згідно з А.15.3

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

4 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

Еозин Н

0,63 г

Згідно з чинними НД

Метиленовий синій

0,076

Згідно з чинними НД

Натрій вуглекислий Na2CO3

0,065

ГОСТ 83

Агар поживний сухий

25 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.12.2 Готування

Інгредієнти розмішують в 1 дм3 дистильованої води, доводять до кипіння і кип’ятять протягом часу від 2 хв. до 3 хв. рН середовища має бути від 7,0 до 7,4. Гаряче середовище фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Середовище стерилізують автоклавуванням за температури (112±1) оС протягом 20 хв. Стерильне середовище охолоджують до температури від 45 оС до 50 оС і розливають у чашки Петрі. Після застигання середовища чашки підсушують за температури (37±1) оС протягом часу від 40 хв. до 60 хв.

А.13 Середовища Гісса з вуглеводами

А.13.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

Вуглеводи (лактоза, глюкоза, сахароза, маніт, мальтоза)

10 г

Згідно з чинними НД

Індикатор Андреде

10 см3

Згідно з А.13.3.1

Розчин бромтимолового синього 1,6 %

1 см3

Згідно з А.13.3.2

А.13.2 Готування

До дистильованої води додають пептон, хлористий натрій (хлорид) і нагрівають до кипіння протягом кількох хвилин, потім фільтрують крізь паперовий фільтр до тих пір, поки розчин не стане майже прозорим. Встановлюють рН (7,2±0,2), додають один із вуглеводів, а потім індикатор Андреде або 1,6 % розчин бромтимолового синього на 1 дм3 середовища.

Готове середовище розливають по 5 см3 у попередньо простерилізовані пробірки (для середовища з глюкозою використовують пробірки з поплавками), стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв. Середовища Гісса з індикатором Андреде мають жовтуватий колір, з індикатором бромтимоловим синім – болотисто-зелений.

А.13.3 Готування індикаторів

А.13.3.1 Індикатор Андреде

А.13.3.1.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Фуксин кислий

0,5 г

Згідно з чинними НД

Натрію гідроокис (1N розчин)NaОН

16 см3

ГОСТ 11078

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.13.3.1.2 Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію, для чого 4 г гідроокису натрію розчиняють у 100 см3 дистильованої води.

Кислий фуксин розчиняють у дистильованій воді, і додають розчин гідроксиду натрію. Одержаний розчин індикатора Андреде ставлять у термостат за температури (37±1) оС на 20 год. Одержаний розчин стерилізують кип’ятінням за температури (100±1) оС або в автоклаві з тиском 0,5 атм. (за температури (112±1) оС) протягом 5 хв. Приготований таким чином індикатор Андреде набуває яскраво-малинового кольору. Реактив, який має рожеве забарвлення не можна використовувати. Індикатор зберігають у флаконах із темного скла з притертим корком.

А.13.3.2 Індикатор бромтимоловий синій

А.13.3.2.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Бромтимоловий синій 0,4 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

40 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Натрію гідроокис (1N розчин)NaОН

6,4 см3

ГОСТ 11078

А.13.3.2.2 Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію як у А.9.3.1.2.

Бромтимоловий синій розчиняють у дистильованій воді, нагріваючи її до кипіння. Після цього до розчину додають гідрооксид натрію, внаслідок чого рідина набуває зеленуватого кольору, і додають дистильовану воду до 100 см3. Приготований таким чином індикатор можна зберігати у темному місці у склянці з притертим корком протягом тривалого часу.

А.14 Середовище Кауфмана

А.14.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Крейда

4,5 г

ГОСТ 8253

М'ясо-пептонний бульйон

90 см3

Згідно з А.6

Розчин Люголя

2 см3

Згідно з А.14.3

Тіосульфат натріюNa2S2O3 .5H2O (розчин 50 %)

10 см3

Згідно з А.14.4

Жовч стерильна

5 см3

Згідно з А.14.5

Діамантовий зелений (водний розчин)

1 см3

Згідно з А.14.6

А.14.2 Готування

Колбу з крейдою стерилізують сухим жаром, наливають м'ясо-пептонний бульйон і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 30 хв. Перед висіванням в асептичних умовах у колбу додають розчин Люголя, розчин тіосульфату натрію, стерильну жовч і водний розчин діамантового зеленого у співвідношенні 1:1000. Суміш старанно збовтують.

А.14.3 Розчин Люголя для готування середовища Кауфмана

А.14.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калій йодистий КІ

25 г

ГОСТ 4232

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Йод кристалічний

20 г

ГОСТ 4159

А.14.3.2 Готування

Йодистий калій розчиняють у дистильованій воді, додають кристалічний йод, залишають на кілька годин до повного його розчинення, а потім доливають решту – до 100 см3 дистильованою водою.

А.14.4 Розчин тіосульфату натрію (сіркуватистокислий натрій, гіпосульфат натрію)

А.14.4.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Сіркуватистокислий натрій (тіосульфат, гіпосульфат) (Na2S2O3 . 5H2O)

50 г

ГОСТ 27068

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.14.4.2 Готування

Хімічно чистий кристалічний сіркуватистокислий натрій (тіосульфат, гіпосульфат) додають до 100 см3 дистильованої води, стерилізують кип’ятінням протягом 30 хв.

А.14.5 Жовч стерильна

Асептично відібрану жовч великого рогатого скота прогрівають на киплячій бані протягом 1 год. Після відстоювання фільтрують і розливають по колбах, стерилізують текучим паром три дні поспіль по 20 хв. або одноразово в автоклаві за температури (121±1) оС. Можна використовувати суху жовч, при цьому 1 г сухої жовчі відповідає 10 см3 натуральної жовчі.

А.14.6 Розчин діамантового зеленого

А.14.6.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Діамантовий зелений

1 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

100 см3

ДСТУ 4221

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.14.6.2 Готування

Діамантовий зелений розчиняють у спирті ректифікаті і настоюють протягом 24 год. До 10 см3 отриманого 1 % спиртового розчину доливають до 100 см3 дистильовану воду, ретельно перемішують. Отримують водний розчин діамантового зеленого у співвідношенні 1:1000.

А.15 Магнієве (хлористо-магнієве) середовище

А.15.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин І

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

7,15 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

Калій фосфорнокислий однозаміщений (дигідрофосфат) КН2РО4

1,48 г

ГОСТ 4198

Дріжджовий діалізат

9 см3

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

890 см3

ГОСТ 6709, ДСТУ ISO 3696

Розчин ІІ

Магнію хлорид MgCl2 . 2О

35,7 г

ГОСТ 4209

Вода дистильована

90 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин ІІІ

Діамантовий зелений (водний розчин 0,5 %)

0,9 см3

Згідно з чинними НД

А.15.2 Готування

Середовище складається з трьох розчинів.

Розчини І та ІІ готують змішуванням наведених компонентів.

Для готування магнієвого середовища з'єднують усі 3 розчини. Середовище розливають у флакони і стерилізують за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Дріжджовий діалізат можна замінити дріжджовим екстрактом, який готують згідно з А.15.3.

А.15.3 Дріжджовий екстракт

А.15.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Дріжджі пресовані пекарські

100 г

ГОСТ 171

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.15.3.2 Готування

Подрібнені дріжджі заливають дистильованою водою, кип’ятять з постійним помішуванням до тих пір, поки не зійде піна, і ставлять на 24 год у холодильник за температури (5±1) оС. Потім емульсію фільтрують крізь вату і фільтрат стерилізують 20 хв. за температури (121±1) оС.

5 см3 рідкого дріжджового екстракту рівноцінні 1 г дріжджового екстракту у порошку.

А.16 Селенітове середовище Лейфсона

А.16.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин А

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Безводний двозаміщений фосфорнокислий натрій (гідро- фосфат) Na2НРО4

7 г

ГОСТ 11773

Однозаміщений фосфорнокислий натрій (дигідрофосфат) NaН2РО4

3 г

ГОСТ 245

Лактоза

4 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована до 1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин Б

Натрію гідроселеніт (кислий селеністокислий атрій) Na2НSeО4

10 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.16.2 Готування

Розчин А Пептон, безводний двозаміщений фосфорнокислий натрій (гідрофосфат), однозаміщений фосфорнокислий натрій (дигідрофосфат), лактозу розчиняють у дистильованій воді, рН має бути (7,0±0,1). Одержану суміш розливають у стерильний посуд по 225 см3 і стерилізують текучим паром або за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Основний розчин можна зберігати протягом часу від одного до двох місяців за температури від 4 оС до 10 оС.

Розчин Б. У дистильованій воді розчиняють натрій кислий селеністокислий. Розчин готують безпосередньо перед використанням.

Перед початком роботи до 225 см3 розчину А стерильно додають 9 см3 розчину Б.

А.17 Пептонна вода

А.17.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

А.17.2 Готування

До дистильованої води додають пептон і хлористий натрій, встановлюють рН (7,4±0,2), кип’ятять, фільтрують крізь паперовий фільтр до повної прозорості і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 30 хв.

А.18 Середовище Ресселя

А.18.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Агар поживний (розчин 2,0 %)

1 дм3

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

МПА

1 дм3

Згідно А.7

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Глюкоза

1 г

ГОСТ 6038

Індикатор Андреде

10 см3

Згідно з А.11.3.1

А.18.2 Готування

До поживного або м'ясо-пептонного агару (рН 7,2) додають лактозу, глюкозу та індикатор Андреде. Середовище розливають у пробірки у кількості від 5 см3 до 6 см3, стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 20 хв. і нахиляють так, щоб агар залишався у вигляді стовпчика на (2-3) см від дна пробірки. Готове середовище має блідо-рожевий колір.

А.19 Середовище Крумвіде-Олькеницького (трицукровий агар з сечовиною)

А.19.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Агар поживний сухий

25 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Сахароза

10 г

ГОСТ 5833

Глюкоза

1 г

ГОСТ 6038

Амоній-залізо (ІІІ) сульфат (сіль Мора) (FeSo4 · (NH4)2O · 6 H2O)

0,2 г

ГОСТ 4208

Натрію тіосульфат (гіпосульфіт, сіркуватистокислий натрій) Na2S2O3 . 5H2O

0,3 г

ГОСТ 27068

Сечовина

10 г

ГОСТ 6691

Феноловий червоний (0,4 % водний розчин)

4 см3

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.19.2 Готування

Солі попередньо розчиняють у невеликому об’ємі дистильованої води. Вуглеводи і сечовину також розчиняють у невеликих об’ємах води з підігріванням на водяній бані. Сухий поживний агар розтоплюють у воді, що залишилася, нагріваючи і помішуючи. Потім усі розчинені інгредієнти з’єднують, перемішують з розтопленим агаром, фільтрують крізь марлевий фільтр, встановлюють рН (7,3±0,1), додають індикатор і розливають у скляні пробірки по (6-7) см3. Середовище стерилізують за температури (112±1) оС протягом 20 хв., нахиляють так, щоб агар залишався у вигляді стовпчика на (2-2,5) см від дна пробірки. Готове середовище має блідо-рожевий колір. Середовище зберігають за кімнатної температури не більше ніж 7 діб.

А.20 Середовище Кліглера

А.20.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Сахароза

10 г

ГОСТ 5833

Глюкоза х.ч. або ч.д.а.

1 г

ГОСТ 6038

Залізо сірчанокисле (FeSО4 х7Н 2)

0,2

ГОСТ 4148

Натрію тіосульфат (Na2S2О3 х 5Н2О)

0,08 г

ГОСТ 27068

Натрію сульфіт (Na2SO3)

0,04 г

ГОСТ 195-77

Феноловий червоний(0,2% розчин в 50 % етиловому спирті

12 см3

Згідно з чинними НД

Агар поживний сухий або агар мікробіологічний

20 г

Згідно з чинними НД ГОСТ 17206

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.20.2 Готування

Компоненти (сахарозу, глюкозу, залізо сірчанокисле, тіосульфат натрію, сульфіт натрію) розчиняють у невеликому об’ємі дистильованої води, нагрітої до температури від 45 0С до 50 0С. Сухий агар розплавляють в окремій посудині у решті дистильованої води з нагріванням. Змішують розчини солей та розплавленого агару, фільтрують через марлевий фільтр, встановлюють рН від 7,2 до 7,4, після чого додають розчин індикатору і ретельно розмішують його. Готове середовище розливають у пробірки по (6-7) см3 і стерилізують текучим паром протягом трьох діб (кожного дня по 20 хв.). Стерильне середовище нахиляють для застигання таким чином, щоб стовпчик був від 2 см до 2,5 см. Готове середовище має бурувато-червоний або жовтогарячо-червоний колір.

А.20.3 Середовище Кліглера сухе

Готують із сухої суміші згідно з написами на етикетці паковання. Готове середовище нахиляють у пробірках так, щоб залишився невеликий стовпчик (приблизно 3 см заввишки).

А.21 Реактив Ерліха

А.21.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Спирт етиловий ректифікований 96 %

56 см3

ДСТУ 4221

Парадиметиламідобензальдегід

4 г

Згідно з чинними НД

Хлористоводнева (соляна) кислота (HCl)

50 см3

ГОСТ 3118

А.21.2 Готування

В етиловому спирті розчиняють парадиметиламідобензальдегід, потім повільно додають концентровану соляну кислоту. Реактив зберігають у посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.22 Реактив Ковача

А.22.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Парадиметиламінобензальдегід

5 г

Згідно з чинними НД

Хлористоводнева (соляна) кислота ?=(1,18-1,19) см3 (HCl)

25 см3

ГОСТ 3118

Спирт ізобутиловий(2-метилбутан-2-ол)(CH3)2CHCH2OH

75 см3

Згідно з чинними НД

А.22.2 Готування

Альдегід розчиняють у спирті з підігріванням на водяній бані за температури від 50 оС до 55 оС, охолоджують і додають кислоту. Реактив повинен мати жовтий колір. Реактив зберігають у посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.23 VP-середовище

А.23.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон

7 г

ГОСТ 13805

Глюкоза

5 г

ГОСТ 6038

Калію гідрофосфат (К2НРО4)

5 г

ГОСТ 4198

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.23.2 Готування

Розчиняють компоненти у воді, нагріваючи за необхідності. За потреби регулюють рН, щоб після стерилізації досягти значення 6,9. Переносять у пробірки і стерилізують в автоклаві за температури 115 оС протягом 20 хв.

А.24 ?-нафтол, етанольний розчин

А.24.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

?-нафтол

6 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

100 см3

ДСТУ 4221

А.24.2 Готування

Розчиняють ?-нафтол в етиловому спирті.

А.25 Розчин креатину (N-амідинорсаркозину)

А.25.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Моногідрат креатину

0,5 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.25.2 Готування

Розчиняють моногідрат креатину у воді.

А.26 Розчин гідроокису калію

А.26.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Гідроокис калію (КОН)

40 г

ГОСТ 24363

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.26.2 Готування

Розчиняють гідроокис калію у воді.

А.27 Папір індикаторний для виявлення індолу

Аркуші фільтрувального паперу згідно з ГОСТ 12026 густо змочують гарячим насиченим 12 % розчином щавлевої кислоти згідно з ГОСТ 22180, висушують за температури (23±2) оС, потім нарізають смужками шириною від 0,2 мм до 0,4 мм, довжиною від 5 см до 6 см і зберігають під корками у посуді з темного скла.

А.28 Розчин оцтовокислого свинцю 20 %

А.28.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Свинець оцтовокислийPb(CH2COO)2 . H2O

20 г

ГОСТ 1027

Натрій двовуглекислий (бікарбонат натрію, гідрокарбонат натрію, сода харчова) NaHCO3

1 г

ГОСТ 2156

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.28.2 Готування

Компоненти розчиняють у воді.

А.29 Сироватки

Готують безпосередньо перед використанням із сухих аглютинуючих адсорбованих полівалентних сальмонельозних сироваток основних груп А, В, С, Д, Е та рідкісних груп згідно з прописом, зазначеним у настанові, яка до них додається.

А.30 Сольовий бульйон

А.30.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПБ

1 дм3

Згідно з А.6

Натрію хлорид (хлористий натрій) NaCl

6,5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

ДСТУ 3583

А.30.2 Готування

МПБ і хлористий натрій змішують у колбі місткістю 2 дм3, розливають у пробірки по 10 см3. Стерилізують (20±1) хв. в автоклаві за температури (121±1) оС. Зберігають не більше ніж 28 діб за температури (4±1) оС.

А.31 Жовтково-сольовий бульйон

А.31.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Сольовий бульйон

1 дм3

Згідно з А.30

Агар поживний сухий

20 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Яйце куряче харчове

1 шт.

ДСТУ 5028

Ізотонічний розчин хлористого натрію

200 см3

Згідно з А.2

А.31.2 Готування

А.31.2.1 До сольового бульйону додають поживний агар, розтоплюють на водяній бані, за необхідності фільтрують крізь ватно-марлевий фільтр, розливають мірним циліндром по 100 см3 у колби місткістю 250 см3 і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 30 хв. Отримують сольовий агар. Замість сольового бульйону можна використовувати, як основу, сухий поживний агар, м'ясо-пептонний бульйон згідно з А.4, бульйон Хоттінгера згідно з чинними нормативними документами, додаючи 6,5 г хлористого натрію згідно з ГОСТ 4233.

А.31.2.2 Для приготування жовткової емульсії на дно стерильної чашки Петрі поміщають куряче яйце, ретельно протирають його ватою, змоченою етиловим спиртом, і обпалюють. Стерильним пінцетом пробивають з двох протилежних сторін яйця два отвори, крізь один з цих отворів з яйця повністю видаляють білок, а потім, дещо збільшивши отвір, виливають жовток у стерильну колбу місткістю 200 см3. До жовтка поступово додають (частинами від 20 см3 до 30 см3) стерильний ізотонічний розчин, вміст ретельно струшують до отримання гомогенної маси.

А.31.2.3 Для виготовлення жовтково-сольового агару на 1 дм3 стерильного розтопленого і охолодженого до (45±1) оС сольового агару додають 200 см3 жовткової емульсії, після повного розмішування жовтково-сольовий агар розливають у стерильні чашки Петрі від 20 см3 до 25 см3 і зберігають у холодильнику до 7 діб.

А.32 Молочно-сольовий агар

А.32.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПА

1 дм3

Згідно з А.7

Молоко знежирене

100 см3

Згідно з чинними НД

А.32.2 Готування

До розплавленого та охолодженого до температури від 60 оС до 70 оС Мпа додають стерильне знежирене молоко. Встановлюють рН (7,4±0,1), ретельно перемішують і розливають у чашки Петрі. Середовище готують безпосередньо перед посівом.

А.33 Середовище з вуглеводом (манітом або мальтозою) і феноловим червоним

А.33.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Агар поживний

1 дм3

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ 17206

Вуглевод (маніт або мальтоза)

10 г

Згідно з чинними НД

Індикатор феноловий червоний (1,6 % водний розчин)

52 см3

Згідно з А.33.2

Дистильована вода

ГОСТ 6709,

ДСТУ ISO 3696

А.33.2 Індикатор феноловий червоний

Для одержання 1,6 % водного розчину фенолового червоного у 100 см3 дистильованої води розчиняють 1,6 г індикатору.

А.33.3 Готування середовища

Один із вуглеводів попередньо розчиняють у невеликому об’ємі стерильної дистильованої води. До розтопленого і охолодженого до (80±2) оС стерильного поживного агару додають вуглевод (маніт або мальтозу) та індикатор феноловий червоний, суміш перемішують, за необхідності ще раз розтоплюють готове середовище, розливають у стерильні чашки Петрі і підсушують. Одержують середовище пурпурово-червоного кольору. Середовище готують з дотриманням стерильності.

А.34 Цитратна плазма крові кролика

Використовують готову зневоднену плазму кроля і регідрують її відповідно до інструкції виробника. Якщо зневоднена плазма кролика відсутня, то розчиняють одну частину свіжої плазми кролика з трьома частинами стерильної води. Регідровану чи розчинену плазму треба відразу використовувати, крім випадків, зазначених в інструкції виробника. Перед використанням перевіряють кожну дозу плазми з коагулазопозитивними штамами стафілококів і штамами, які її не коагулюють.

А.35 Сухі середовища: поживний агар, агар Кліглера, вісмут-сульфітний агар, середовища Плоскірєва, Левіна, Ендо, Гісса, Кесслера, Хейфеца, селенітове, дріжджовий екстракт, жовч великої рогатої худоби, МПА, МПБ тощо.

Готують із сухих сумішей згідно з інструкціями на етикетках паковань. Виготовлені і розлиті у стерильний посуд середовища маркують із зазначенням назви середовища, дати виготовлення та терміну придатності і зберігають згідно з інструкцією від виробника.

А.35.1 Всі сухі поживні середовища і діагностичні імунобіологічні препарати повинні бути дозволені до використання в Україні і мати сертифікат якості (паспорт) відділу контролю організації-виробника та інструкцію з використання.

Варто використовувати стандартизовані сухі поживні середовища промислового виробництва. У цьому випадку треба дотримуватися способу готування, використання, умов та терміну зберігання, вказаних на етикетці.

А.35.2 Сухі поживні середовища зберігають згідно з інструкцією від виробника. Відкриті упаковки щільно закривають. Середовища зі зміненою консистенцією (ущільнені, з грудками) або зміненим кольором не використовують.

Дату приготування та результати контролю якості поживних середовищ реєструють в «Журналі приготування та контролю поживних середовищ» (форма N 256/0).

А.36 Матеріали та реактиви для швидких та альтернативних методів аналізу готують за прописом виробника.

А.37 Дозволено застосовувати інші аналогічні реактиви та готові поживні середовища, у тому числі і закордонного виробництва, які стандартизовано і зареєстровано в Україні.

Pages: 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Залишити відповідь

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься. Обов’язкові поля позначені *

:wink: :twisted: :roll: :oops: :mrgreen: :lol: :idea: :evil: :cry: :arrow: :?: :-| :-x :-o :-P :-D :-? :) :( :!: 8-O 8)