Ukrainian Dutch English French Italian Polish Russian Turkish
Птахівництво України і cвіту | менеджмент, аналітика, реформи, стандарти


Птиця сільськогосподарська. Методи лабораторної діагностики сальмонельозу

 

Додаток А

(обов’язковий)

 ПОЖИВНІ СЕРЕДОВИЩА І РЕАКТИВИ

А.1 Поживні середовища готують у лабораторії, дотримуючись вимог ДСТУ ISO/TS 11133-1.

А.1.1 Для готування розчинів, реактивів і поживних середовищ використовують воду дистильовану згідно з ГОСТ 6709, ДСТУ ISO 3696 або очищену. Готують у посуді з інертного матеріалу.

А.1.2 Всі середовища, які стерилізують в автоклаві, готують у стерильному посуді і розливають у стерильний посуд.

А.1.3 Враховуючи можливу зміну pH поживних середовищ після кип'ятіння та стерилізації, під час готування середовищ встановлюють pH на 0,2 вище вказаного, що визначають дослідним шляхом для кожного середовища. Заключний контроль pH проводять у готовому середовищі з використанням pH-метра (рідкі середовища) або паперових індикаторів з шагом діапазону не більше ніж 0,2 (агаризовані середовища). Визначання проводять згідно з інструкцією з використання приладу або індикаторної системи.

А.1.4 Після стерилізації поживні середовища охолоджують за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС), після чого поміщають у холодильник з температурою (6±2) оС, якщо в Інструкції щодо застосування конкретного препарату не вказано інші умови зберігання.

А.1.5 Готові, розлиті у пробірки, напіврідкі поживні середовища та середовища з поплавками зберігають за кімнатної температури не більше ніж 7 діб.

Температуру середовищ, які зберігали у холодильнику, перед посівом треба довести до кімнатної.

Якщо середовище необхідно розлити у чашки Петрі, то його охолоджують до температури від 50 оС до 60 оС.

А.1.6 На поверхні розлитого у чашки Петрі середовища не повинно бути слідів вологи. В разі наявності на поверхні середовища слідів вологи чашки перед використанням підсушують у термостаті.

А.2 Гліцериновий консервант

А.2.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Натрію хлорид (NaCl)0,85 % розчин

1000 см3

ГОСТ 4233

 Гліцерин

500 см3

ГОСТ  6824

Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4) 20 % розчин

150 см3

ГОСТ 11773

А.2.2 Готування

Готують 0,85 % розчин натрію хлориду (8,5 г хлориду натрію або кухонної солі розчиняють у 1000 см3 дистильованої води) і 20 % розчин натрію гідрофосфату (200 г натрію гідрофосфату безводного розчиняють у 1000 см3 дистильованої води). Розчин натрію хлориду змішують з гліцерином, додають розчин натрію гідрофосфату, встановлюючи рН у межах від 7,8 до 8,0. Приготований консервант розливають у пробірки чи флакони, стерилізують в автоклаві за температури (112±0,5) оС протягом 15 хв. або в апараті Коха протягом 30 хв три дні поспіль. Після стерилізації рН повинен бути у межах від 7,6 до 7,8.

А.3 Фосфатно-буферний консервант

А.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

0,45

ГОСТ 2493

Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4)

5,34

ГОСТ 11773

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.3.2 Готування

Сіль розчиняють у дистильованій воді, розливають у пробірки чи флакони і стерилізують в автоклаві за температури (121±0,5) оС протягом 30 хв.

А.4 Буферний гліцериново-сольовий консервант

А.4.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Натрію хлорид (NaCl)

4,2 г

ГОСТ 4233

Калію гідрофосфат (К2НРО4)

3,1 г

ГОСТ 4198

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

1,0 г

ГОСТ 2493

Гліцерин

300 см3

ГОСТ  6824

Вода дистильована

700 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.4.2 Готування

Солі розчиняють у дистильованій воді, додають гліцерин і одержану суміш розливають у бактеріологічні пробірки місткістю 20 см3 по 5 см3 у кожну пробірку. Стерилізують в автоклаві за температури (112±0,5) оС протягом 30 хв. Готовий консервант підфарбовують феноловим червоним.

А.5 Буферизована пептонна вода

А.5.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

0,45

ГОСТ 2493

Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4)

5,3

ГОСТ 11773

Пептон

10,0 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (NaCl)

5,0 г

ГОСТ 4233

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.5.2 Готування

Компоненти розчиняють у дистильованій воді, підігріваючи за необхідності. Розчин розливають у пробірки чи флакони і стерилізують в автоклаві за температури (121±0,5) оС протягом 30 хв.

А.6 М'ясо-пептонний бульйон (МПБ)

А.6.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Фарш м’ясний (яловичина, конина)

0,5 кг

Згідно з чинними НД

Вода питна (водопровідна)

до 2 дм3

ГОСТ 2874

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (NaCl)

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

5 г

ДСТУ 3583

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Натрію гідроокис (NaОН)

ГОСТ 11078

А.6.2 Готування

Фарш заливають дво- або трикратною кількістю водопровідної води (за масою), нагрівають і кип’ятять протягом 1,5 год., постійно помішуючи і видаляючи накип. Після кип’ятіння м’ясну воду охолоджують, видаляють жир. Рідину фільтрують крізь вату чи полотно, потім крізь фільтрувальний папір до повної прозорості. Фільтрат вимірюють і доливають до початкового об’єму кип’яченою водопровідною водою.

До м’ясної води додають пептон, натрію хлорид (сіль) і дистильовану воду (на википання); кип’ятять до розчинення пептону. До гарячого бульйону додають 10 % розчин гідроокису натрію до встановлення рН (7,4±0,2), після чого бульйон кип’ятять ще раз протягом 15 хв. і фільтрують через зволожений дистильованою водою складчастий паперовий фільтр. Профільтрований бульйон повинен бути цілком прозорим, солом’яно-жовтого кольору. Бульйон розливають у ємності (колби) і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.7 Середовище селеніту-цистину

А.7.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Триптон

5 г

Згідно з чинними НД

Лактоза

4 г

Додекагідрат гідрофосфату натрію (Na2НР4 . 12Н2О)

10 г

Натрію гідроселеніт (Na2НSeО4)

4 г

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин L-цистину

10 см3

Згідно з А.7.3

А.7.2 Готування

Триптон, лактозу та додекагідрат гідрофосфату натрію розчиняють у воді кип’ятінням протягом 5 хв. Після охолодження додають гідроселеніт натрію. Регулюють рН до 7,0. До одержаної основи асептично додають розчин L-цистину і знову регулюють рН до 7,0. Розподіляють середовище у стерильні колби. Середовище використовують у день приготування.

А.7.3 Розчин L-цистину

А.7.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

L-цистин

0,1 г

Згідно з чинними НД

Натрію гідроокис (NaОН)1N розчин

15 см3

ГОСТ 11078

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.7.3.2 Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію, для чого 4 г натрію гідроокису (NaОН) розчиняють у 100 см3 дистильованої води. 15 см3 одержаного розчину поміщають у мірну колбу, додають L-цистин. Розводять до 100 см3 стерильною водою.

А.8 Селенітове середовище Лейфсона

А.8.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин А

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Натрію гідрофосфат (Na2НРО4)

7 г

ГОСТ 11773

Натрію дигідрофосфат (NaН2РО4)

3 г

ГОСТ 245

Лактоза

4 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована до 1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин Б

Натрію гідроселеніт (Na2НSeО4)

10 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.8.2 Готування

Розчин А. Пептон, безводний двозаміщений фосфорнокислий натрій (гідрофосфат), однозаміщений фосфорнокислий натрій (дигідрофосфат), лактозу розчиняють у дистильованій воді, рН має бути (7,0±0,1). Одержану суміш розливають у стерильний посуд по 225 см3 і стерилізують текучим паром або за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Основний розчин можна зберігати протягом часу від одного до двох місяців за температури від 4 оС до 10 оС.

Розчин Б. У дистильованій воді розчиняють гідроселеніт натрію. Розчин готують безпосередньо перед використанням.

Перед початком роботи до 225 см3 розчину А стерильно додають 9 см3 розчину Б.

А.9 Магнієве (хлористо-магнієве) середовище

А.9.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин І

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (NaCl)

7,15 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна  

ДСТУ 3583

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

1,48 г

ГОСТ 2493

Дріжджовий  діалізат

9 см3

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

890 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин ІІ

Магнію хлорид (MgCl2 . 2О)

35,7 г

ГОСТ 4209

Вода дистильована

90 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин ІІІ

Діамантовий зелений (водний розчин 0,5 %)

0,9 см3

Згідно з чинними НД або

згідно з А.9.3

А.9.2 Готування

Середовище складається з трьох розчинів.

Розчини І та ІІ готують змішуванням наведених компонентів.

Для готування магнієвого середовища з'єднують усі 3 розчини. Середовище розливають у флакони і стерилізують за температури (112 ±1) оС протягом 30 хв. Встановлюють рН (7,2±0,2) готового середовища за температури 25о С.

Дріжджовий діалізат можна замінити дріжджовим екстрактом, який готують згідно з А.10.

А.9.3 Розчин діамантового зеленого концентрації 5 г/дм3

А.9.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Діамантовий зелений

0,5 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.9.3.2 Готування

Порошок діамантового зеленого насипають у фарфорову ступку і повільно розчиняють у дистильованій воді. Розчин переливають до мірної колби місткістю 100 см3 і доводять дистильованою водою до мітки (позначки). Розчин зберігають у закритому посуді з темного скла за кімнатної температури не більше ніж 3 міс.

А.10 Дріжджовий екстракт

А.10.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пресовані пекарські дріжджі

100 г

ГОСТ 171

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.10.2 Готування

Подрібнені пресовані дріжджі заливають дистильованою водою, кип’ятять з постійним помішуванням до тих пір, поки не зійде піна, і ставлять на 24 год. у холодильник за температури (5±1) оС. Потім емульсію фільтрують крізь вату, і фільтрат стерилізують 20 хв. за температури (121±1) оС.

5 см3 рідкого дріжджового екстракту рівноцінні 1 г дріжджового екстракту у порошку.

А.11 Середовище Мюллера (тетратіонатовий бульйон Мюллера)

А.11.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Крейда

45 г

ГОСТ 12085

абоКальцію карбонат (СаСО3)

25 г

ГОСТ 8253

Бульйон Хоттінгера з вмістом 120-130 мг% амінного азоту

900 см3

Згідно з чинними НД

абоМПБ

Згідно з А.6

Розчин Люголя

20 см

Згідно з А.11.3

Натрію тіосульфат(Na2S2O3 . 5H2O)(розчин 50 %)

100 см3

Згідно з А.11.4

А.11.2 Готування

У стерильні флакони насипають по 4,5 г крейди, стерилізують сухим жаром, після чого у кожний флакон наливають по 90 см3 бульйону Хоттінгера або МПБ і стерилізують за температури 121 оС протягом 30 хв. Після стерилізації рН середовища повинно дорівнювати від 7,2 до 7,4. У кожний флакон extempore з дотриманням правил асептики додають по 2 см3 розчину Люголя і по 10 см3 розчину натрію тіосульфату, ретельно перемішують і розливають у пробірки.

А.11.3 Розчин Люголя

А.11.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію йодид (КІ)

20 г

ГОСТ 4232

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Йод кристалічний

25 г

ГОСТ 4159

А.11.3.2 Готування

Йодид калію розчиняють у дистильованій воді, додають кристалічний йод, залишають на кілька годин до повного його розчинення, а потім доливають решту – до 100 см3 дистильованою водою.

А.11.4 Розчин натрію тіосульфату

А.11.4.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Натрію тіосульфат(Na2S2O3 .5H2O)

50 г

ГОСТ 27068

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.11.4.2 Готування

Хімічно чистий кристалічний натрію тіосульфат додають до 100 см3 дистильованої води, стерилізують кип’ятінням протягом 30 хв.

А.12 Середовище Кауфмана

А.12.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Крейда

4,5 г

ГОСТ 8253

МПБ

90 см3

Згідно з А.6

Розчин Люголя

2 см3

Згідно з А.11.3

Натрію тіосульфат(Na2S2O3 .5H2O) (розчин 50 %)

10 см3

Згідно з А.11.4

Жовч стерильна

5 см3

Згідно з А.12.3

Діамантовий зелений (водний розчин)

1 см3

Згідно з А.12.4

А.12.2 Готування

Колбу з крейдою стерилізують сухим жаром, наливають МПБ і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 30 хв. Перед висіванням в асептичних умовах у колбу додають розчин Люголя, розчин тіосульфату натрію, стерильну жовч і водний розчин діамантового зеленого у співвідношенні 1:1000. Суміш старанно збовтують.

А.12.3 Жовч стерильна

Асептично відібрану жовч великої рогатої худоби прогрівають на киплячій бані протягом 1 год. Після відстоювання фільтрують і розливають по колбах, стерилізують текучим паром три дні поспіль по 20 хв. або одноразово в автоклаві за температури (121±1) оС. Можна використовувати суху жовч, при цьому 1 г сухої жовчі відповідає 10 см3 натуральної жовчі.

А.12.4 Розчин діамантового зеленого

А.12.4.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Діамантовий зелений

1 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

100 см3

ДСТУ 4221

Вода дистильована до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.12.4.2 Готування

Діамантовий зелений розчиняють в етиловому спирті і настоюють протягом 24 год. До 10 см3 отриманого 1 % спиртового розчину доливають до 100 см3 дистильовану воду, ретельно перемішують. Отримують водний розчин діамантового зеленого у співвідношенні 1:1000.

А.13 Середовище хлориду магнію-малахітового зеленого Раппапорта-Васіліадіса (RV середовище)

А.13.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин А

ТриптонабоСоєвий пептон

1 г

Згідно з чинними НД

Натрію хлорид (NaCl)

8 г

ГОСТ 4233

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

1,6 г

ГОСТ 2493

Вода дистильована  1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин Б

Магнію хлорид (MgCl2 . 2О)

400 г

ГОСТ 4209

Вода дистильована  1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин В

Оксалат малахітового зеленого

0,4 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.13.2 Готування

Готують розчин А, для цього відповідні компоненти розчиняють у воді, нагріваючи до температури приблизно 70 оС. Розчин треба готувати у день готування RV середовища.

Для розчину Б розчиняють хлорид магнію у воді. Розчин зберігають у посудині з темного скла за кімнатної температури.

Для розчину В розчиняють оксалат малахітового зеленого у воді. Розчин зберігають у посудині з темного скла за кімнатної температури.

До 1000 дм3 розчину А, додають 100 см3 і 10 см3 розчину С. Регулюють рН так, щоб після стерилізації було значення 5,2. Перед використанням розподіляють середовище по 10 см3 у пробірки. Стерилізують в автоклаві за температури 115 оС протягом 15 хв. Приготоване середовище зберігають у холодильнику.

А.14 Середовище Левіна

А.14.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон сухий ферментативний для бактеріологічних цілей

15 г

ГОСТ 13805

Гідролізат казеїну ферментативний неглибокого ступеню розщеплення

12 г

Згідно з чинними НД

 

Дріжджовий екстракт

3 г

Згідно з чинними НД

або А.11

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Натрію хлорид (NaCl)

4 г

ГОСТ 4233

Еозин Н

0,63 г

Згідно з чинними НД

Метиленовий синій

0,076

Згідно з чинними НД

Натрій вуглекислий (Na23)

0,065

ГОСТ 83

Агар поживний сухий

25 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.14.2 Готування

Інгредієнти розмішують в 1 дм3 дистильованої води, доводять до кипіння і кип’ятять протягом часу від 2 хв. до 3 хв. рН середовища має бути від 7,0 до 7,4. Гаряче середовище фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Середовище стерилізують автоклавуванням за температури (112±1) оС протягом 20 хв. Стерильне середовище охолоджують до температури від 45 оС до 50 оС і розливають у чашки Петрі. Після застигання середовища чашки підсушують за температури 37 оС протягом часу від 40 хв. до 60 хв.

А.15 Агар-агар феноловий червоний-діамантовий зелений (середовище Еделя і Кампельмахера)

А.15.1 Склад

 

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Основа

Порошок м’ясного екстракту

5 г

Згідно з чинними НД

Пептон

10 г

Порошок дріжджового екстракту

3 г

Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4) 20 % розчин

1 г

ГОСТ 11773

Натрію дигідрофосфат (NaН2РО4)

0,6 г

ГОСТ 245

Агар-агар

(12-18) г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин 1

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Сахароза

10 г

ГОСТ 5833

Феноловий червоний

0,09 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин 2

Діамантовий зелений

0,5 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.15.2 Готування

Для готування основи розчиняють відповідні компоненти у воді, нагріваючи за необхідності. Регулюють рН так, щоб після стерилізації було значення 7,0. Переносять приготовану основу у пробірки чи колби відповідної місткості. Стерилізують в автоклаві за температури 121 оС протягом 15 хв.

Для готування розчину 1 (розчин цукру фенолового червоного) відповідні компоненти розчиняють приблизно у 100 см3 і доводять водою до 100 см3. Нагрівають на водяній бані за температури 70 оС протягом 20 хв., охолоджують до температури (55 ± 1) оС і використовують негайно.

Готують розчин 2 (розчин діамантового зеленого – Еделя і Кампельмахера). Для цього додають діамантовий зелений у воду. Одержаний розчин зберігають не менше ніж 24 год у темряві для само стерилізації.

Щоб приготувати кінцеве середовище, спочатку асептично додають розчин діамантового зеленого до розчину цукру фенолового червоного, охолодженого до температури (55 ± 1) оС. Одержаний розчин додають до основи за температури від 50 оС до 55 оС і перемішують.

Щойно приготоване середовище розливають у чашки Петрі (приблизно по 40 см3 – у великі чашки і по 15 см3 – у маленькі). Дають середовищу застигнути. Перед використанням чашки з середовищем підсушують (знявши кришки і перевернувши чашки поверхнею середовища вниз) за температури від 37 оС до 55 оС до висихання поверхні середовища. Невисушені чашки з середовищем можна зберігати за кімнатної температури не більше ніж 4 год, у холодильнику – більше ніж 24 год.

А.16 М'ясо-пептонний агар (МПА)

А.16.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПБ

1 дм3

Згідно з А.6

Агар-агар

2(20) г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

А.16.2 Готування

До МПБ додають агар-агар (агар мікробіологічний): 2 г для виготовлення напіврідкого або 20 г для виготовлення щільного м'ясо-пептонного агару. Суміш кип’ятять на слабкому вогні, постійно помішуючи, до повного розчинення агару.

Приготований МПА розливають у пробірки або колби і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.17 Ізотонічний розчин хлористого натрію (фізіологічний розчин)

А.17.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Натрію хлорид (NaCl)

8,5 г

ГОСТ 4233

А.17.2 Готування

Сіль розчиняють у дистильованій воді. Розчин доводять до кипіння, охолоджують, фільтрують крізь паперовий фільтр, розливають у колби або пробірки і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

А.18 Середовища Гісса з вуглеводами

А.18.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Вода дистильована

1 дм3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Пептон

10 г

ГОСТ 13805

Натрію хлорид (NaCl)

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

5 г

ДСТУ 3583

Вуглевод

5 г або 10 г

Згідно з чинними НД

Індикатор Андреде

10 см3

Згідно з А.19.1 

абоРозчин бромтимолового синього 1,6 %

1 см3

Згідно з А.19.2 

          Примітка.    

А.18.2 Готування

До дистильованої води додають пептон, натрію хлорид (сіль) і нагрівають до кипіння протягом кількох хвилин, потім фільтрують крізь паперовий фільтр до тих пір, поки розчин не стане майже прозорим. Встановлюють рН (7,2±0,2), додають один із вуглеводів: лактозу, глюкозу, маніт, сахарозу – у кількості 10 г, рамнозу, ксилозу, арабінозу, саліцин, трегалозу, рафінозу, целобіозу, дульцит, сорбіт, адоніт – у кількості 5 г та один з індикаторів.

Готове середовище розливають по 5 см3 у попередньо простерилізовані пробірки (для середовища з глюкозою використовують пробірки з поплавками), стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв. Середовища Гісса з індикатором Андреде мають жовтуватий колір, з індикатором бромтимоловим синім – болотисто-зелений.

А.19 Готування індикаторів

А.19.1 Індикатор Андреде

А.19.1.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Фуксин кислий

0,5  г

Згідно з чинними НД

Натрію гідроокис (1N розчин)

16 см3

ГОСТ 11078

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.19.1.2 Готування

Готують 1N розчин гідроксиду натрію, для чого 4 г натрію гідроокису (NaОН) розчиняють у 100 см3 дистильованої води.

Кислий фуксин розчиняють у дистильованій воді, і додають розчин гідроокису натрію. Одержаний розчин індикатора Андреде ставлять у термостат за температури (37±1) оС на 20 год. Одержаний розчин стерилізують кип’ятінням за температури (100±1) оС або в автоклаві з тиском 0,5 атм. протягом 5 хв. Приготований таким чином індикатор Андреде набуває яскраво-малинового кольору. Реактив, який має рожеве забарвлення не можна використовувати. Індикатор зберігають у флаконах із темного скла з притертим корком.

А.19.2 Індикатор бромтимоловий синій

А.19.2.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Бромтимоловий синій

0,4  г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

40 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Гідроокис натрію (1N розчин)

6,4 см3

ГОСТ 11078

А.19.2.2 Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію як у А.19.1.2

Бромтимоловий синій розчиняють у дистильованій воді, нагріваючи її до кипіння. Після цього до розчину додають гідрооксид натрію, внаслідок чого рідина набуває зеленуватого кольору, і додають дистильовану воду до 100 см3. Приготований таким чином індикатор можна зберігати у темному місці у склянці з притертим корком протягом тривалого часу.

А.20 Трицукровий агар

А.20.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Агар поживний сухий

15 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

МПБ

1000 см3

Згідно з А.6

Дріжджовий екстракт сухий

3 г

Згідно з чинними  НД

абоДріжджовий екстракт

15 см3

Згідно з А.11

Глюкоза

10 г

ГОСТ 6038

Сахароза

10 г

ГОСТ 5833

Лактоза

10 г

Згідно з чинними НД

Заліза цитрат Fe3(C6H3O7)2

0,3 г

Згідно з чинними НД

абоАмоній-залізо (ІІІ) сульфат  (сіль Мора)  FeSo4 · (NH4)2O · 6 H2O)

0,2 г

ГОСТ 4208

абоЗаліза сульфат (FeSO4 . 7H2O)

0,2 г

ГОСТ 4148

Натрію  тіосульфат(Na2S2O3 . 5H2O)

0,3 г

ГОСТ 27068

Феноловий  червоний

6 см3

Згідно з А.20.3

А.20.2 Готування

Феноловий червоний та агар розчиняють при нагріванні у м’ясо-пептонному бульйоні, охолоджують до температури від 45 оС до 55 оС і встановлюють рН так, щоб після стерилізації за температури 25 оС він дорівнював (7,2±0,2). Середовище розливають у пробірки по (6-7) см3 і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 10 хв.

А.20.3 Спиртовий розчин фенолового червоного концентрації 4 г/дм3

А.20.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Феноловий червоний

0,4 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

100 см3

ДСТУ 4221

А.20.3.2 Готування

Порошок фенолового червоного переносять у колбу місткістю 100 см3, розчиняють в етиловому спирті об’ємної концентрації 50 % і доводять розчин етиловим спиртом до мітки (позначки).

А.21 VP-середовище (середовище Кларка)

А.21.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон

7 г

ГОСТ 13805

Глюкоза

5 г

ГОСТ 6038

Калію гідрофосфат (К2НРО4)

5 г

ГОСТ 4198

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.21.2 Готування

Розчиняють компоненти у воді, нагріваючи за необхідності. За потреби регулюють рН, щоб після стерилізації досягти значення від 6,9 до 7,0. Переносять у пробірки і стерилізують в автоклаві за температури 115 оС протягом 20 хв.

А.22 Метиловий червоний (тест-реактив)

А.22.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Метиловий червоний

0,1 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

300 см3

ДСТУ 4221

Вода дистильована

200 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.22.2 Готування

Метиловий червоний розчиняють у спирті і доводять об’єм дистильованою водою до 500 см3.

А.23 Спиртовий розчин α-нафтолу концентрації 50 г/дм3

А.23.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

α-нафтол

50 г

Згідно з чинними НД

Спирт етиловий ректифікований 96 %

10 см3

ДСТУ 4221

А.23.2 Готування

α-нафтол поміщають у колбу місткістю 10 см3, розчиняють у спирті і доводять розчин етиловим спиртом до позначки. Розчин готують безпосередньо перед застосуванням.

А.24 Розчин калію гідроокису масової концентрації 400 г/дм3

А.24.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію гідроокис (КОН)

40 г

ГОСТ 24363

Вода дистильована

100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.24.2 Готування

Гідроокис калію переносять у мірну колбу місткістю 100 см3 і розчиняють у дистильованій воді. Розчин доводять до мітки (позначки).

А.25 Реактив Ерліха

А.25.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Спирт етиловий ректифікований 96 %

56 см3

ДСТУ 4221

Парадиметиламінобензальдегід

4 г

Згідно з чинними НД

Хлористоводнева (соляна) кислота (HCl)

50 см3

ГОСТ 3118

А.25.2 Готування

В етиловому спирті розчиняють парадиметиламідобензальдегід, потім повільно додають концентровану соляну кислоту. Реактив зберігають у посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.26 Реактив Ковача

А.26.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Парадиметиламінобензальдегід

5 г

Згідно з чинними НД

Хлористоводнева (соляна) кислота ρ=(1,18-1,19) см(HCl)

25 см3

ГОСТ 3118

Спирт ізобутиловий

 

 

(2-метилбутан-2-ол)

(CH3)2CHCH2OH

75 см3

Згідно з чинними НД

А.26.2 Готування

Альдегід розчиняють у спирті з підігріванням на водяній бані за температури від 50 оС до 55 оС, охолоджують і додають кислоту. Реактив повинен мати жовтий колір. Реактив зберігають у посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.27 Індикаторні папірці на індол

А.27.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Парадиметиламінобензальдегід

5 г

Згідно з чинними НД

Кислота ортофосфорна (Н3РО4)

10 см3

ГОСТ 6552

Спирт метиловий(метанол) CH3-OH

50 см3

Згідно з чинними НД

А.27.2 Готування

Альдегід розчиняють у спирті з підігріванням на водяній бані за температури від 50 оС до 55 оС, охолоджують і додають кислоту. Реактив повинен мати жовтий колір. У реактиві змочують фільтрувальний папір і висушують його за температури від 18 оС до 20 оС. Папір нарізають смужками шириною 0,5 см і довжиною 5,0 см. Колір папірців – жовтий. Папірці зберігають у посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.28 Середовище Кристенсена з сечовиною

А.28.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Глюкоза

1 г

ГОСТ 6038

Натрію хлорид (NaCl)

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

5 г

ДСТУ 3583

Калію дигідрофосфат (КН2РО4)

2 г

ГОСТ 2493

Феноловий червоний 0,2 % розчин

3 см3

Згідно з чинними НД

Агар мікробіологічний

15 г

ГОСТ  17206

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Розчин сечовини 400 г/дм3

50 см3

Згідно з А.28.3

А.28.2 Готування

Готують шляхом з’єднання основи середовища і розчину сечовини. Для основи середовища пептон, глюкозу, натрію хлорид (сіль), дигідрофосфат калію, розчин фенолового червоного та агар розчиняють з нагріванням у дистильованій воді, охолоджують до температури від 45 оС до 55 оС і встановлюють рН так, щоб після стерилізації і охолодження до температури 25о С він дорівнював (6,7±0,1).

Основу розливають у колби чи флакони і стерилізують за температури (121±1) оС протягом 20 хв.

До 950 см3 основи додають асептично 50 см3 розчину сечовини, розливають у стерильні пробірки по (6-7) см3.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 2 см до 2,5 см. Колір готового середовища – світло-рожевий.

А.28.3 Розчин сечовини 400 г/дм3

А.28.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Сечовина

40 г

ГОСТ 6691

Вода дистильована

до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.28.3.2 Готування

Сечовину насипають у колбу місткістю 100 см3, розчиняють у дистильованій воді, об’єм розчину доводять дистильованою водою до мітки (позначки).

А.29 Середовище з сечовиною (за Преусом)

А.29.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Бульйон Хоттінгера

1000 см3

Згідно з чинними НД

Агар поживний сухий

15 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

Глюкоза

5 г

ГОСТ 6038

Сечовина  50 % водний розчин

20 см3

Згідно з А.29.3

Індикатор (бромтимоловий синій 0,2 % водний розчин)

12 см3

Згідно з чинними НД

А.29.2 Готування

Агар розплавляють у бульйоні, фільтрують, доводять рН до величини від 6,9 до 7,0, стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 20 хв. У стерильний поживний агар додають глюкозу, розчин сечовини, індикатор. Готове поживне середовище у кількості від 2 см3 до 3 см3 розливають у стерильні бактеріологічні пробірки місткістю 20 см3. Пробірки з середовищем стерилізують в апараті Коха протягом 15 хв.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 1 см до 1,5 см. Колір готового середовища – оливковий.

А.29.3 Розчин сечовини 50 %

А.29.3.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Сечовина

50 г

ГОСТ 6691

Вода дистильована

до 100 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.29.3.2 Готування

Сечовину насипають у колбу місткістю 100 см3, розчиняють у дистильованій воді, об’єм розчину доводять дистильованою водою до мітки (позначки).

А.30 Цитратний агар Сіммонса

А.30.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Натрію хлорид (NaCl)

5 г

ГОСТ 4233

абоСіль кухонна

5 г

ДСТУ 3583

Магнію сульфат (MgSO4 . 7H2O)

1 г

ГОСТ 4523

Амонію дигідрофосфат(NH4Н2РО4)

1 г

Згідно з чинними НД

Калію гідрофосфат (К2НРО4)

2 г

ГОСТ 4198

Натрію цитрат(С6Н5О73 . 5H2O)

2 г

ГОСТ 22280

Індикатор (бромтимоловий синій 0,2 % водний розчин)

40 см3

Згідно з чинними НД

Агар поживний сухий

20 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.30.2 Готування

Ретельно промитий агар розплавляють підігріванням у дистильованій воді. Солі розчиняють у невеликій кількості дистильованої води і додають до розплавленого агару. Доводять об’єм дистильованою водою до 1000 см3. рН повинен бути 7,2. Додають індикатор, ретельно перемішують. Готове поживне середовище у кількості від 5 см3 до 7 см3 розливають у стерильні бактеріологічні пробірки місткістю 20 см3. Пробірки з середовищем стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 15 хв. або за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 2 см до 2,5 см.

А.31 Середовища з амінокислотами (лізином, орнітином, аргініном)

А.31.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПБ

400 см3

Згідно з чинними НД

або згідно з А.6

Глюкоза

5 г

ГОСТ 6038

Вода дистильована

600 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

Індикатор (бромкрезоловий пурпуровий 1,6 % спиртовий розчин)

0,6 см3

Згідно з чинними НД

Індикатор (крезоловий червоний 0,1 % спиртовий розчин)

5 см3

Згідно з чинними НД

L-амінокислота

20 г

Згідно з чинними НД

або DL-амінокислота

Згідно з чинними НД

          Примітка. Як білкову поживну основу можна використовувати 5 г пептону і 3 г дріжджового екстракту  або  5 см3  гідролізату  казеїну  і 5 см3 дріжджового екстракту на 1000 см3 середовища. Індикатори можуть бути замінені бром тимоловим синім (1,6 % спиртовий розчин) у кількості 1 см3.  використовувана кількість амінокислот може бути зменшена до 10 г чи 5 г (1 % чи 0,5%).

А.31.2 Готування

Білкову поживну основу і глюкозу розчиняють у воді, встановлюючи рН у межах від 6,0 до 6,1. Середовище розділяють на 4 однакові порції, у три з яких додають одну з амінокислот. У четверту порцію амінокислоту не додають. Виготовлені середовища кип’ятять протягом часу від 5 хв. до 10 хв., встановлюють рН у межах від 6,0. В усі чотири середовища додають індикатор, перемішують, розливають у пробірки. Пробірки з середовищем стерилізують в автоклаві за температури (121±1)оС протягом 15 хв. або за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 2 см до 2,5 см.

А.32 Середовище для декарбоксилування L-лізину

А.32.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Моногідрохлорид L-лізину

5 г

Згідно з чинними НД

Дріжджовий екстракт

3 г

Згідно з чинними НД

або А.11

Глюкоза

ГОСТ 6038

Індикатор (бромкрезоловий пурпуровий)

0,015 г

Згідно з чинними НД

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.32.2 Готування

Розчиняють компоненти у воді, за необхідності нагріваючи. Встановлюють рН у межах 6,8. Середовище розливають у бактеріологічні пробірки і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 10 хв.

А.33 Напіврідкий МПА

А.33.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

МПБ

1000 см3

Згідно з А.6

Агар-агар

від 4 г

до 8 г

Згідно з чинними НД

абоАгар мікробіологічний

ГОСТ  17206

А.33.2 Готування

Готують як МПА згідно з А.16. Перед стерилізацією середовище розливають по (6-7) см3 у пробірки.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 2 см до 2,5 см. Середовище повинно бути повністю прозорим.

А.34 Середовище для визначання редукції нітратів

А.34.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Калію нітрат (КNО3)

0,2 г

ГОСТ 4168

Пептон

5 г

ГОСТ 13805

Вода дистильована

1000 см3

ГОСТ  6709,

ДСТУ ISO 3696

А.34.2 Готування

Компоненти змішують, установлюють рН рівним 7,4. Середовище розливають по 5 см3 у пробірки з поплавками і стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 15 хв.

А.35 Реактиви Грісса

А.35.1 Склад

Назва складника

Кількість

Нормативний документ

Розчин А

Кислота сульфанілова

0,8 г

ГОСТ 5821

Кислота оцтова (5N розчин)

100 см3

ГОСТ 61

Розчин Б

α-нафтиламін

0,5 г

Згідно з чинними НД

абоДиметил-α-нафтиламін

0,6 г

Кислота оцтова (5N розчин)

100 см3

ГОСТ 61

Компоненти для розчинів А та Б відповідно розчиняють, злегка підігріваючи. Розчини можна зберігати у посуді з темного скла з притертими корками у холодильнику (за температури від 4 оС до 8 оС) протягом трьох місяців з дня виготовлення. Перед використанням розчини перевіряють на відомих тест-штамах мікроорганізмів.

А.36 Сироватки

Готують безпосередньо перед використанням із сухих аглютинуючих адсорбованих полівалентних сальмонельозних сироваток основних груп А, В, С, Д, Е та рідкісних груп згідно з прописом, зазначеним у настанові, яка до них додається.

А.37 Замість наведених середовищ не заборонено використовувати сухі середовища промислового виробництва згідно з чинними нормативними документами.

А.37.1 Сухі середовища: поживний агар, вісмут-сульфітний агар, середовища Плоскірєва, Левіна, Ендо, Гісса, Мюллера, Кауфмана, Кристенсена, селенітове, дріжджовий екстракт, МПА, МПБ, агар МакКонки, феноловий червоний-діамантовий зелений агар-агар, діамантовий зелений агар, ксилозо-лізин-дезоксихолатний агар (XLD Agar, КЛД-агар), дезоксихолат-цитратний агар, Rambach агар тощо.

Готують із сухих сумішей згідно з інструкціями на етикетках паковань. Виготовлені і розлиті у стерильні чашки Петрі середовища можна зберігати за температури (4±1) оС до 10 діб.

А.37.2 Всі сухі поживні середовища і діагностичні імунобіологічні препарати повинні бути дозволені до використання в Україні і мати сертифікат якості (паспорт) відділу контролю організації-виробника та інструкцію з використання.

Варто використовувати стандартизовані сухі поживні середовища промислового виробництва. У цьому випадку треба дотримуватися способу готування, використання, умов та терміну зберігання, вказаних на етикетці.

А.37.3 Сухі поживні середовища зберігають у сухих темних приміщеннях за кімнатної температури. Відкриті упаковки щільно закривають. Середовища із зміненою консистенцією (ущільнені, з грудками) або зміненим кольором не використовують.

А.37.4 Усі виготовлені поживні середовища маркують із зазначенням назви середовища, дати виготовлення та терміну придатності.

Дату приготування та результати контролю якості поживних середовищ реєструють у «Журналі приготування та контролю поживних середовищ» (форма № 256/0).

А.38 Дозволено застосовувати інші аналогічні реактиви та готові поживні середовища, у тому числі і закордонного виробництва, які зареєстровано в Україні.

Pages: 1 2 3 4 5 6

Залишити відповідь

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься. Обов’язкові поля позначені *

:wink: :twisted: :roll: :oops: :mrgreen: :lol: :idea: :evil: :cry: :arrow: :?: :-| :-x :-o :-P :-D :-? :) :( :!: 8-O 8)