Ukrainian Dutch English French Italian Polish Russian Turkish
Птахівництво України і cвіту | менеджмент, аналітика, реформи, стандарти


Птиця сільськогосподарська. Методи лабораторної діагностики колібактеріозу

 Додаток А

(обов’язковий)

Поживні середовища  і реактиви

А.1   Поживні середовища готують у  лабораторії, дотримуючись вимог ДСТУ ISO/TS 11133-1.

А.1.2 Всі середовища, які стерилізують в автоклаві, готують у стерильному посуді і розливають у стерильний посуд.

А.1.3 Враховуючи можливу зміну pH поживних середовищ після кип'ятіння та стерилізації, під час готування середовищ встановлюють pH на 0,2 вище вказаного, що визначають дослідним шляхом для кожного середовища. Заключний контроль pH проводять у готовому середовищі з використанням pH-метра (рідкі середовища) або паперових індикаторів з шагом діапазону не більше ніж 0,2 (агаризовані середовища). Визначення проводять згідно з інструкцією з використання приладу або індикаторної системи.

А.1.4 Після стерилізації поживні середовища охолоджують за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС), після чого поміщають у холодильник з температурою (6±2) оС, якщо в Інструкції щодо застосування конкретного препарату не вказано інші умови зберігання.

А.1.5 Готові розлиті у пробірки напіврідкі поживні середовища та середовища  з  поплавками  зберігають за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС)  не більше ніж 7 діб.

Температуру середовищ, які зберігали у холодильнику, перед посівом треба довести до кімнатної (від 18 оС до 20 оС).

Якщо середовище необхідно розлити у чашки Петрі, то його охолоджують до температури від 50 оС до 60 оС.

А.1.6  На поверхні розлитого у чашки Петрі середовища не повинно бути слідів вологи. В разі наявності на поверхні середовища слідів вологи чашки перед використанням підсушують у термостаті.

А.2 Гліцериновий консервант

А.2.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Натрію хлорид (NaCl)0,85 % розчин 1000 см3 ГОСТ 4233
 Гліцерин 500 см3 ГОСТ  6824
Натрію гідрофосфат безводний (Na2НРО4) 20 % розчин 150 см3 ГОСТ 11773

А.2.2 Готування

Готують 0,85 % розчин натрію хлориду (8,5 г хлориду натрію або кухонної солі розчиняють у 1000 см3 дистильованої води) і 20 % розчин натрію гідрофосфату (200 г натрію гідрофосфату безводного розчиняють у 1000 см3 дистильованої води). Розчин натрію хлориду змішують з гліцерином, додають розчин натрію гідрофосфату, встановлюючи рН у межах від 7,8 до 8,0. Приготований консервант розливають у пробірки чи флакони, стерилізують в автоклаві за температури (112±0,5) оС  протягом  15 хв. або в апараті Коха протягом 30 хв три дні поспіль. Після стерилізації рН повинен бути у межах від 7,6 до 7,8.

А.3 Ізотонічний розчин хлористого натрію (фізіологічний розчин)

А.3.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Натрію хлорид (NaCl) 8,5 г ГОСТ 4233

А.3.2 Готування

Сіль розчиняють у дистильованій воді. Розчин доводять до кипіння, охолоджують, фільтрують крізь паперовий фільтр, розливають у колби або пробірки і стерилізують за температури (121±1) оС  протягом  20 хв.

А.4   М'ясо-пептонний бульйон (далі – МПБ)

А.4.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Фарш м’ясний (яловичина, конина) 0,5 кг Згідно з чинними нормативними документами
Вода питна (водопровідна) до 2 дм3 ГОСТ 2874
Пептон 10 г ГОСТ 13805
Натрію хлорид (NaCl) 5 г ГОСТ 4233
абоСіль кухонна 5 г ДСТУ 3583
Дистильована вода 100 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Натрію гідроокис (NaОН) ГОСТ 11078

А.4.2 Готування

Фарш заливають дво- або трикратною кількістю водопровідної води  (за масою), нагрівають і кип’ятять  протягом 1,5 год., постійно помішуючи і видаляючи накип. Після  кип’ятіння м’ясну воду охолоджують, видаляють жир. Рідину фільтрують  крізь вату чи полотно, потім крізь фільтрувальний папір до повної прозорості. Фільтрат вимірюють і доливають до початкового об’єму кип’яченою водопровідною водою.

До м’ясної води додають пептон, натрію хлорид (кухонну сіль) і дистильовану  воду (на википання); кип’ятять до розчинення пептону. До гарячого бульйону додають 10 % розчин гідроокису натрію до встановлення рН (7,4±0,2), після чого бульйон кип’ятять ще раз протягом 15 хв. і фільтрують через зволожений дистильованою водою складчастий паперовий фільтр. Профільтрований бульйон  повинен бути цілком прозорим, солом’яно-жовтого кольору. Бульйон розливають у ємності (колби) і стерилізують за температури (121±1) оС  протягом  20 хв.

А.5   М'ясо-пептонний агар (далі – МПА)

А.5.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
МПБ 1 дм3 Згідно з А.3
Агар-агар 2(20) г Згідно з чинними НД
або агар мікробіологічний ГОСТ  17206

А.5.2 Готування

До МПБ додають агар-агар (агар мікробіологічний): 2 г для виготовлення  напіврідкого або 20 г для виготовлення щільного м'ясо-пептонного агару. Суміш кип’ятять на слабкому вогні,  постійно помішуючи, до повного розчинення агару.

Приготований  МПА розливають  у пробірки або колби і стерилізують  в автоклаві  за температури (121±1) оС  протягом  20 хв.

А.6 Середовище Левіна

А.6.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Пептон сухий ферментативний для бактеріологічних цілей 15 г ГОСТ 13805
Гідролізат казеїну ферментативний неглибокого ступеню розщеплення 12 г Згідно з чинними НД
Дріжджовий екстракт 3 г Згідно з А.6.3
Лактоза 10 г Згідно з чинними НД
Натрію хлорид (NaCl) 4 г ГОСТ 4233
Еозин Н 0,63 г Згідно з чинними НД
Метиленовий синій 0,076 Згідно з чинними НД
Натрій вуглекислий (Na23) 0,065 ГОСТ 83
Агар поживний сухий 25 г Згідно з чинними НД
абоагар мікробіологічний ГОСТ  17206
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.6.2  Готування

Інгредієнти розмішують в 1 дм3 дистильованої води, доводять до кипіння і кип’ятять протягом часу від 2 хв. до 3 хв. рН середовища має бути від 7,0 до 7,4.  Гаряче середовище фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Середовище стерилізують автоклавуванням за температури (112±1) оС протягом 20 хв. Стерильне середовище охолоджують до температури від 45 оС до 50 оС і розливають у чашки Петрі. Після застигання середовища чашки підсушують за температури 37 оС протягом часу  від 40 хв. до 60 хв.

А.6.3 Дріжджовий екстракт

А.6.3.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Дріжджі пекарські пресовані 100 г ГОСТ 171
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.6.3.2  Готування

Подрібнені пресовані дріжджі заливають дистильованою водою, кип’ятять  з постійним помішуванням до тих пір, поки не зійде піна, і ставлять на 24 год у  холодильник за температури (5±1) оС. Потім емульсію фільтрують крізь вату і фільтрат стерилізують 20 хв. за температури (121±1) оС.

5 см3 рідкого дріжджового екстракту рівноцінні 1 г дріжджового екстракту у порошку.

А.7  Середовище Кесслера (з лактозою)

А.7.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Пептон 10 г ГОСТ 13805
Натуральна стерильна жовч,або суха яловича жовч 50  см3 5 г
Вода питна 1 дм3 ГОСТ 2874
Лактоза 2,5 г Згідно з чинними НД
Вода дистильована до 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Індикатор  кристалічногофіолетового або генціан фіолетового (1% водний розчин) 2 см3 Згідно з чинними НД

А.7.2  Готування

Пептон, натуральну стерильну або суху яловичу жовч додають до водопровідної води, ретельно перемішують, кип’ятять  протягом часу від 20 хв до 30 хв, фільтрують крізь ватний фільтр, додають лактозу і доводять об’єм дистильованою водою до 1 дм3 .  Встановлюють  рН (7,5±0,1),   додають  2 см3  1 % водного розчину кристалічного фіолетового або генціан фіолетового. Середовище  розливають по 5 см3 у пробірки з поплавками і стерилізують за температури (121±1) оС  протягом  15 хв. Середовище  має фіолетовий колір.

А.8  Бульйон Мак-Конки

А.8.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Пептон 20 г ГОСТ 13805
Глюкоза 10 г ГОСТ 6038
Натрій хлористий (натрію хлорид) (NaCl) 5 г ГОСТ 4233
Натуральна стерильна жовч,або суха яловича жовч 50  см3 5 г
Бромкреазол пурпуровий 10  см3 А.8.3
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.8.2  Готування

Пептон, натуральну стерильну або суху яловичу жовч, глюкозу,  хлорид натрію, розчин  бромкреазол пурпуровий додають до дистильованої води, нагрівають на слабкому вогні до кипіння, кип’ятять  протягом часу від 1 хв до 2 хв, фільтрують крізь ватно-марлевий фільтр, охолоджують до температури  від 45 оС до 55 оС і встановлюють  рН таким чином, щоб після стерилізації він становив за температури 25 оС (7,2±0,1). Одержане середовище розливають по 10 см3 у пробірки з поплавками і стерилізують за температури (121±1) оС  протягом  15 хв.

А.8.3  Розчин  бромкреазол пурпуровий з концентрацією 10 г/дм3

А.8.3.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Бромкреазол пурпуровий 1 г Згідно з чинними НД
Натрію гідроокис (0,1N розчин) 19 см3 ГОСТ 11078
Вода дистильована 80 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.8.3.2  Готування

Готують 0,1N розчин гідроксиду натрію, для чого  0,4 г натрію гідроокису (NaОН) розчиняють у 100 см3 дистильованої води.

Наважку бромкреазолу пурпурового переносять у фарфорову ступку з розчином гідроокису натрію і після розчинення додають дистильовану  воду. Розчин зберігають у закритому посуді з темного скла за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС) не більше ніж 3 місяці.

А.9 Сорбітол E. сoli O157:H7 агар

А.9.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Панкреатичний гідролізат рибного борошна 12,0 г Згідно з чинними НД
Дріжджовий екстракт 1,0 г Згідно з А.6.3
Натрій хлористий (натрію хлорид) (NaCl) 3,4 г ГОСТ 4233
Д-сорбіт 10,0 г Згідно з чинними НД
Натрію сульфіт (Na2SO3) 0,8 г ГОСТ 195-77
Натрію гідрофосфат безводний 0,5 г ГОСТ 11773
Фуксин основний 0,2 Згідно з чинними НД
Агар-агар 10,0±2,0 Згідно з чинними НД
абоАгар мікробіологічний ГОСТ  17206
Вода дистильована 1000 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.9.2  Готування

Компоненти розчиняють  в 1000 см3 дистильованої води, кип’ятять від 2 хв. до 3 хв. (до повного розплавлення агару), фільтрують через ватно-марлевий фільтр, знову доводять до кипіння, охолоджують до температури від 45 °С до 50 °С і розливають у стерильні чашки Петрі шаром від 5 мм до 6 мм. Залишають для застигання і підсушування за температури від 18 °С до 25 °С протягом часу від 40 хв. до 60 хв.  рН готового середовища повинно бути (7,4±0,2). Готове поживне середовище у чашках Петрі прозоре,  рожевого кольору. Середовище треба використати у день готування і зберігати до посіву у темряві.

А.10 Реактиви для оксидазного тесту

А.10.1 Варіант 1

1 %-ний водний розчин тетраметил-п-фенілендіаміну гідрохлорид.

Готують перед використанням.

А.10.2 Варіант 2

Реактив № 1. 1 %-ний спиртовий розчинр α-нафтолу.

Реактив № 2. 1 %-ний водний розчин фенілендіамінової сполуки.

Розчини зберігають у темных флаконах з притертими корками: перший  – до одного місяця, другий – до одного тижня. Перед використанням до трьох частин першого розчину додають сім частин другого розчину.

А.10.3 Варіант 3

Від 30 мг до 40  мг g- нафтолу розчиняють у 2,5 мл ректифікованого етилового  спирту,  додають 7,5  мл  дистильованої води і розчиняють (40-60)   мг диметилфенілендіаміну. Розчин готують безпосередньо перед дослідженням.

А.10.4 Варіант 4

Набір реактивів для оксидазного тесту промислового виробництва.

Набір реактивів призначений для виявляння цитохромоксидази під час постановки оксидазного тесту і складається з 4 флаконів, які містять у певному співвідношенні α-нафтол та диметил-п-фенілендіамін, до яких додаються   смужки фільтрувального паперу та інструкція по застосуванню реагентів.

А.10.5 Перед роботою з кожною серією проб реактиви або тест-системи на оксидазу треба випробовувати з тест-культурами мікроорганізмів, які дають позитивну (Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens) та гнгативну оксидазну реакцю (Е. соli).

А.11 Середовища Гісса з вуглеводами (глюкозою,  лактозою)

А.11.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Пептон 10 г ГОСТ 13805
Натрій хлористий (натрію хлорид) (NaCl) 5 г ГОСТ 4233
Вуглевод (глюкоза,  лактоза) 10 г Згідно з чинними НД
Індикатор Андреде 10 см3 Згідно з А.11.3
Розчин бромтимолового синього 1,6 % 1 см3 Згідно з А.11.4

А.11.2  Готування

До дистильованої води додають пептон, хлорид натрію і нагрівають до кипіння протягом кількох хвилин, потім фільтрують крізь паперовий фільтр до тих пір, поки розчин не стане майже прозорим. Встановлюють рН (7,2±0,2), додають один  із  вуглеводів, а потім індикатор  Андреде або 1,6 % розчин бромтимолового синього на 1 дм3 середовища.

Готове середовище розливають по 5 см3 у пробірки, попередньо простерилізовані разом з пробірками і поплавками, розташованими запаяним кінцем  догори; стерилізують за температури (121±1) оС  протягом  20 хв. Під час стерилізації поплавки заповнюються до самого верху поживним  середовищем. Середовище Гісса з індикатором Андреде мають солом’яно-жовтий колір, з індикатором  бромтимоловим синім – болотисто-зелений.

А.11.3  Індикатор Андреде

А.11.3.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Фуксин кислий 0,5  г Згідно з чинними НД
Натрію гідроокис NаОН(1N розчин) 16 см3 ГОСТ 11078
Вода дистильована 100 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.11.3.2  Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію, для чого  4 г гідроокису натрію розчиняють у 100 см3 дистильованої води.

Кислий фуксин розчиняють у дистильованій воді, і додають розчин гідроокису натрію. Одержаний розчин індикатора Андреде ставлять у термостат за температури  (37±1) оС на 20 год. Одержаний розчин стерилізують кип’ятінням або в автоклаві з тиском 0,5 атм. протягом 5 хв. Приготований  таким чином індикатор Андреде набуває яскраво-малинового кольору. Реактив, який має рожеве забарвлення, не можна використовувати. Індикатор зберігають у флаконах із темного скла  з притертим корком.

А.11.4  Індикатор бромтимоловий синій

А.11.4.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Бромтимоловий синій 0,4  г Згідно з чинними НД
Дистильована вода ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Натрію гідроокис NаОН 6,4 см3 ГОСТ 11078

А.11.4.2  Готування

Готують 1N розчин гідроксиду натрію  як у А.8.3.2. Бромтимоловий синій розчиняють у  дистильованій  воді, нагріваючи її до кипіння. До цього розчину додають гідроокис натрію, внаслідок чого рідина набуває зеленуватого кольору, і додають дистильовану воду до 100 см3.  Приготований таким чином індикатор можна зберігати у темному місці у склянці з притертим корком протягом тривалого часу.

А.12   МПБ з триптофаном

А.12.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
МПБ 100 см3 Згідно з А.4
L-триптофан 0,05 г Згідно з чинними НД

А.12.2 Готування

L-триптофан  розчиняють  в  100 см3 МПБ, розливають  у  пробірки  по (6-7) см3 і стерилізують за температури (121±1) оС протягом часу від 12 хв. до 15 хв.

А.13 Індикаторний папір  для визначення індолу

А.13.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Парадиметиламінобензальдегід від 3 г до 5 г Згідно з чинними НД
Кислота фосфорна (ортофосфорна) (Н3РО4) 10 см3 ГОСТ 6552
Спирт етиловий ректифікований 96 % 50 см3 ДСТУ 4221
Папір фільтрувальний   ГОСТ 12026

А.13.2  Готування

Парадиметиламінобензальдегід, концентровану фосфорну кислоту і  етиловий спирт ретельно перемішують у фарфоровій ступці. В отриманому розчині змочують фільтрувальний папір, висушують і нарізають вузькими смужками шириною приблизно 1 см. Колір отриманого паперу – жовтий.

А.14  Реактив Ерліха

А.14.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Спирт етиловий ректифікований 96 % 56 см3 ДСТУ 4221
Парадиметиламідобензальдегід 4 г Згідно з чинними НД
Кислота хлористоводнева (соляна) (HCl) 50 см3 ГОСТ 3118

А.14.2  Готування

В етиловому спирті розчиняють парадиметиламідобензальдегід,  потім  повільно додають  концентровану соляну кислоту. Реактив зберігають  у  посуді з темного скла за температури від 4 оС до 8 оС.

А.15   Середовище Козера

А.15.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696
Натрій-амоній фосфорнокислий двозаміщений (NaNH4HPO4 x H2O) 1,5 г ГОСТ 4170
Калій фосфорнокислий однозаміщений (калію гідрофосфат) (К2HPO4) 1,0 г ГОСТ 4198
Магній сірчанокислий (магнію сульфат)(MgSO4 х 7H2O) 0,2 г ГОСТ 4523
Натрій лимоннокислий    (натрію цитрат) (Na3С6H5O7 x 5H2O) 3,0 г ГОСТ 31227
Бромтимоловий синій 10 см3 Згідно з А.15.3

А.15.2 Готування

Натрій-амоній фосфорнокислий двозаміщений, калій фосфорнокислий однозаміщений, сульфат магнію та цитрат натрію розчиняють у дистильованій воді з нагріванням до температури від 80 оС до 100 оС,  охолоджують до температури від  45 оС до 55 оС і встановлюють рН (7,2±0,1) за допомогою 1N розчину  гідроокису  натрію  або соляної кислоти. Кінцеве рН за температури 25 оС має бути у межах (7,2±0,1). Середовище стерилізують за температури (121±1) оС протягом 15 хв. Після стерилізації до 1 дм3 середовища додають спиртовий розчин бромтимолового синього з масовою концентрацією 5 г/дм3. Отримане середовище розливають по (6-7) см3 у стерильні пробірки. Готове середовище має оливково-зелений колір.

А.15.3  Бромтимоловий синій (0,5 % спиртовий розчин)

А.15.3.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Бромтимоловий синій 0,5  г Згідно з чинними НД
Спирт етиловий ректифікований 96 % до 100 см3 ДСТУ 4221

А.15.3.2  Готування

Бромтимоловий синій поміщають  у мірну колбу місткістю 100 см3 і доводять етиловим спиртом до позначки (мітки). Розчин зберігають за температури (4±1) оС протягом 30 діб.

А.16  Середовище Сіммонса

А.16.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Середовище Козера 1 дм3 Згідно з А.15
Агар мікробіологічний 20 г ГОСТ  17206

А.16.2  Готування

Середовище готують так само як середовище  Козера або на його основі. Після вимірювання   рН  до середовища  Козера додають агар, прогрівають на водяній бані до розплавлення агару, фільтрують через ватно-марлевий фільтр.

Готове поживне середовище у кількості від 5 см3 до 7 см розливають у стерильні бактеріологічні пробірки місткістю 20 см3. Пробірки з середовищем стерилізують в автоклаві за температури (121±1) оС протягом 15 хв. або за температури (112±1) оС протягом 30 хв.

Після стерилізації середовище нахиляють під кутом 30о так, щоб залишався стовпчик висотою від 2 см до 2,5 см.

А.17  Середовище Кліглера

А.17.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Лактоза 10  г Згідно з чинними НД
Сахароза 10 г ГОСТ 5833
Глюкоза х.ч. або ч.д.а. 1 г ГОСТ 6038
Залізо сірчанокисле (FeSО4 х7Н2) 0,2 ГОСТ 4148
Натрію тіосульфат (Na2S2О3 х 5Н2О) 0,08 г ГОСТ 27068
Натрію сульфіт (Na2SO3) 0,04 г ГОСТ 195-77
Феноловий червоний(0,2% розчин в 50 % етиловому спирті 12 см3 Згідно з чинними НД
Агар поживний сухийабо агар мікробіологічний 20 г Згідно з чинними НД ГОСТ  17206
Вода дистильована 1000 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.17.2  Готування

Компоненти (сахарозу, глюкозу, залізо сірчанокисле, тіосульфат натрію, сульфіт натрію) розчиняють у невеликому об’ємі дистильованої води, нагрітої до температури від 45 °С  до 50 °С. Сухий агар розплавляють в окремій посудині у решті дистильованої води з нагріванням. Змішують розчини солей та розплавленого агару, фільтрують через марлевий фільтр, встановлюють рН від 7,2 до 7,4, після чого додають розчин індикатору і ретельно розмішують його. Готове середовище розливають у пробірки по (6-7) см3 і стерилізують текучим паром протягом трьох діб (кожного дня по  20 хв.). Стерильне середовище нахиляють для застигання таким чином, щоб стовпчик був від 2 см до 2,5 см. Готове середовище має бурувато-червоний або жовтогарячо-червоний колір.

А.18 Середовище Крумвіде-Олькеницького (трицукровий  агар з сечовиною)

А.18.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Агар поживний сухийабо агар мікробіологічний 25 г Згідно з чинними НДГОСТ  17206
Лактоза 10 г Згідно з чинними НД
Сахароза 10 г ГОСТ 5833
Глюкоза х.ч. або ч.д.а. 1 г ГОСТ 6038
Амоній-залізо (ІІІ) сульфат  (сіль Мора)  (FeSo4 · (NH4)2O · 6 H2O) 0,2 г ГОСТ 4208
Натрію тіосульфат(Na2S2О3 х 5Н2О) 0,3 г ГОСТ 27068
Сечовина 10 г ГОСТ 6691
Феноловий червоний 4 см3 Згідно з чинними НД
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.18.2  Готування

Готують 0,4 % водний  розчин фенолового червоного, для чого порошок фенолового червоного переносять у колбу місткістю 100 см3, розчиняють у невеликій кількості дистильованої води і доводять розчин до мітки (позначки) дистильованою водою.

Солі попередньо розчиняють у невеликому об’ємі дистильованої води. Вуглеводи і сечовину також розчиняють у невеликих об’ємах води з підігріванням на водяній бані. Сухий поживний агар  розтоплюють у воді, що залишилася, нагріваючи і помішуючи. Потім усі розчинені інгредієнти з’єднують, перемішують з розтопленим агаром, фільтрують  крізь марлевий фільтр, встановлюють рН (7,3±0,1), додають індикатор (0,4 % водний  розчин фенолового червоного) і розливають у скляні пробірки по (6-7) см3. Середовище стерилізують за  температури (112±1) оС протягом 20 хв. поверхню середовища нахиляють так, щоб агар залишався у вигляді  стовпчика  на  (2-2,5) см  від  дна пробірки. Готове середовище має блідо-рожевий колір. Середовище зберігають за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС) не більше ніж 7 діб.

А.19 Середовище Кларка для реакцій з метиловим червоним  (метилротом) та Фогес-Проскауера

А.19.1  Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Пептон ферментативний 5 г ГОСТ 13805
Калій фосфорнокислий двозаміщений(К2НРО4) 5 г ГОСТ 2493
Глюкоза 5 г ГОСТ 6038
Вода дистильована 1 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.19.2 Готування

Компоненти розчиняють у  воді, встановлюють рН (6,9±0,1). Середовище  кип’ятять протягом часу від двох до трьох хвилин, фільтрують через паперовий фільтр,  розливають у  пробірки по 5 см3 і стерилізують при 0,5 атм. протягом 15 хв.

А.20 Спиртовий розчин α-нафтолу концентрації 50 г/дм3

А.20.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
α-нафтол 50 г Згідно з чинними НД
Спирт етиловий ректифікований 96 % 10 см3 ДСТУ 4221

А.20.2  Готування

α-нафтол поміщають у колбу місткістю 10 см3, розчиняють у спирті і доводять розчин етиловим спиртом до позначки (мітки). Розчин готують безпосередньо перед застосуванням.

А.21 Розчин гідроокису калію масової концентрації 400 г/дм3

А.21.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Калію гідроокис (КОН) 40 г ГОСТ 24363
Вода дистильована 100 см3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.21.2  Готування

Гідроокис калію переносять у мірну колбу місткістю 100 см3 і розчиняють у дистильованій воді. Розчин доводять до  позначки (мітки).

А.22 Середовище із сечовиною (за Преусом)

А.22.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Бульйон Хоттінгера 110 см3 Згідно з чинними НД
Агар-агар 15 г Згідно з чинними НД
або агар мікробіологічний ГОСТ  17206
Сечовина (50 % водний розчин) 20 см3 ГОСТ 6691
Глюкоза 5 г ГОСТ 6038
Бромтимоловий синій (0,2 % водний розчин) 12 см3 Згідно з чинними НД

А.22.2  Готування

Агар розплавляють у бульйоні Хоттінгера з підігріванням, фільтрують, встановлюють рН від 6,9 до 7,0. Стерилізують за температури (112±1) °С протягом 20 хв. До стерильного поживного агару додають глюкозу, розчини  сечовини та бромтимолового синього. Середовище розливають у пробірки по (2-3) см3 (до 5 см3). Стерилізують текучою парою одноразово протягом  15 хв., після чого встановлюють ємність із середовищем у похилому положенні і охолоджують. Готове середовище має зеленкувато-оливковий колір.

А.23 Розчин фенолового червоного (фенолроту)

А.23.1 Склад

Назва складника Кількість Нормативний документ
Феноловий червоний (фенолрот) кристалічний 4 г Згідно з чинними НД
Гідроокис натрію (розчин 0,1 N) 160 см3 Згідно з А.8.3.2
Дистильована вода до 2 дм3 ГОСТ  6709,ДСТУ ISO 3696

А.23.2  Готування

Готують 1N розчин гідроокису натрію  як у А.8.3.2. Кристалічний фенолрот розчиняють у 0,1 N розчину гідроокису натрію і поміщають у водяну баню за температури 37 оС.  Після повного розчинення кристалів розчин доводять до 2 дм3 дистильованою водою і витримують у термостаті за температури 37 оС протягом 20 хв.

А.24  Замість наведених середовищ не заборонено використовувати сухі середовища промислового виробництва згідно з чинними нормативними документами.

А.24.1 Сухі середовища:  поживний агар, середовище з сорбітом (ЕДКС-агар), середовища Левіна, Ендо, Гісса, дріжджовий екстракт, МПА, МПБ, тощо.

Із сухих сумішей поживні середовища готують згідно  з інструкціями  на  етикетках  паковань.  Виготовлені  і розлиті у стерильні чашки Петрі середовища   можна   зберігати за  температури (4±1) оС до 10 діб.

А.24.2 Всі сухі поживні середовища і діагностичні імунобіологічні препарати повинні бути дозволені до використання в Україні і мати сертифікат якості (паспорт) відділу контролю організації-виробника та інструкцію з використання.

Варто використовувати стандартизовані сухі поживні середовища промислового виробництва. У цьому випадку треба дотримуватися способу готування, використання, умов та терміну зберігання, вказаних на етикетці.

А.24.3 Сухі поживні середовища зберігають у сухих темних приміщеннях за кімнатної температури (від 18 оС до 20 оС). Відкриті упаковки щільно закривають. Середовища із зміненою консистенцією (ущільнені, з грудками) або зміненим кольором не використовують.

А.24.4 Усі виготовлені поживні середовища маркують із зазначенням назви середовища, дати виготовлення та терміну придатності.

Дату приготування та результати контролю якості поживних середовищ реєструють в "Журналі приготування та контролю поживних середовищ" (ф. N 256/0).

А.25 Всі реактиви повинні бути кваліфікації ч., х.ч. або ч.д.а.

А.26 Сироватки

Готують безпосередньо перед використанням із сухих аглютинуючих типоспецифічних ОК-сироваток згідно з прописом, зазначеним у настанові, яка до них додається.

А.27 Дозволено застосовувати інші аналогічні реактиви та готові поживні середовища, у тому числі і закордонного виробництва, які зареєстровані в Україні.

Pages: 1 2 3 4 5 6 7

Залишити відповідь

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься. Обов’язкові поля позначені *

:wink: :twisted: :roll: :oops: :mrgreen: :lol: :idea: :evil: :cry: :arrow: :?: :-| :-x :-o :-P :-D :-? :) :( :!: 8-O 8)